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文库构建概念

DNA文库构建是二代测序技术的基础，其目的是将待测定样本的大片段基因组DNA片段化为小片段的DNA，之后在小片段DNA分子两端添加测序接头，形成能上机测序的有效文库的过程。文库构建，*终是将待测的DNA或RNA样本转化为适合测序的文库。

文库构建流程

1.打断及末修: 将DNA或RNA打断为适合测序平台的片段大小并修复末端损伤

2.加接头：在片段两端加上特定的接头序列

3.DNA纯化：去除文库中的杂质，提高文库质量

4.文库扩增：通过PCR扩增文库，增加文库的产量

5.文库质检：评估文库的质量，包括文库的浓度、片段大小分布、纯度以及是否存在污染等，以确保文库符合测序要求

文库构建方法

DNA建库方法是分子生物学的实验原理，其本质就是在待测片段两端加上接头的过程，由于NGS测序的应用广泛，不同应用方向的文库制备流程仍有较大差异，目前建库方法包括以下四种。

1. 物理/酶切打断建库

通过物理或酶切打断基因组DNA，然后通过连接酶将接头连接到DNA片段上，*后通过PCR扩增。这种方法可以有效保留样本的几乎所有基因组信息，适用于全基因组测序。包括TA连接接头建库、平末端连接接头建库、Swift法建库！

2. 转座酶建库

转座酶法建库技术的关键是Tn5转座子，Tn5转座子是一种细菌转座子，本质是一段含有若干抗性基因和编辑转座酶基因的DNA片段。转座酶建库利用Tn5转座子将DNA片段化、末端修复、接头连接等多步反应转变为一步反应，大大缩短了建库时间。起始量低至1ng，适用于珍贵的样本或低核酸含量的样本。

3. 杂交捕获建库

杂交捕获根据核酸分子碱基互补配对原则，针对目标区域设计特异探针，打断基因组DNA,加上测序接头后与探针杂交,将基因组DNA目标区域捕获下来，回收目标DNA片段即可。

4. PCR扩增子建库

扩增子建库是指利用PCR反应在待测DNA片段两端加上接头的方法，原理相对比较简单，只需要两轮PCR和两步纯化就可以得到目标区域的文库，**步是含通用序列的引物与目标区域结合，第二步通过PCR反应连接测序接头，使得构建的文库可以用于上机测序。

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